lectia a saisprezecea

Lectia a saisprezecea
Scop: verificarea sensibilitatii masuratorilor dumneavoastra. (Cata substanta trebuie sa aveti pentru a obtine un rezultat pozitiv?)

Materiale: apa filtrata, sare, pahar de sticla pentru masurat, 13 flacoane noi din sticla care au capacitatea a cel putin 1/4 ceasca, 14 lingurite noi din material plastic, esantionul dumneavostra de tesut, servetel.

Metoda: unele dintre cele mai bune sisteme de masurare disponibile astazi sunt cele imunologice (cum ar fi testul ELISA161) si pot detecta pana la 100 fg/ml (femtograme la mililitru). Un mililitru este cam cat un bob de mazare, iar un femtogram este a 1/1 000 000 000 000 000- a parte dintr-un gram (IO15)!
1.Clatiti paharul de sticla pentru masurat cu apa filtrata si puneti o jumatate de lingurita de sare de masa in el. Completati pana la o cana, amestecand cu o lingura de plastic. Ce concentratie are? O lingurita are cam 5 grame, o cana are cam 230 mililitri, prin urmare, concetratia initiala este de circa 2 Vi (2,5) g la 230 ml, sau 0,01 g/ml (vom discuta mai tarziu cat de mare este eroarea).
2.Etichetati o lingura de plastic curata apa si folositi-o pentru a pune noua linguri pline de apa filtrata intr-un flacon curat de sticla. Folositi o alta lingura curata de plastic pentru a transfera o lingura plina de solutie de sare 0,01 g/ml din cana de masura in flaconul de sticla, amestecati, apoi aruncati lingura. Flaconul de sticla are acum o dilutie de 1 la 10 si concentratia sa este o zecime din cea initiala sau 0,001 g/ml.
3.Utilizati lingura de apa pentru a pune noua linguri pline de apa filtrata in flaconul nr.2. Folositi o lingura noua pentru a transfera o lingura de solutie de sare din flaconul nr.l in flaconul nr.2 si amestecati putin (nu scuturati deloc). Etichetati flaconul nr.2 „0,0001 g/ml.
4.Repetati operatiunea cu flacoanele ramase. Flaconul nr. 13 va fi, prin urmare, etichetat 0,000000000000001 g/ml. Aceasta inseamna IO15 g/ml sau 1 femtogram/ml.
5.Faceti testul de piele cu apa din flaconul nr.13 ca in Lectia a cincea. Daca puteti detecta aceasta, sunteti de o suta de ori mai sensibil decat un test ELISA (si ar trebui sa faceti un flacon nr.14 si sa continuati, daca sunteti curios sa obtineti o sensibilitate si mai buna). Daca nu puteti, incercati sa detectati apa din flaconul nr.12 (de zece ori mai sensibil decat testul ELISA). Continuati pana ajungeti la un flacon pe care il puteti detecta.

Calculati eroarea experimentului dumneavoastra presupunand ca ati putea pierde circa 10% la masurarea sarii si adaugand o eroare de pana la 20% la fiecare dintre cele 13 dilutii. Aceasta inseamna o eroare totala, la flaconul nr.13, de 280% sau cel mult un factor de 3. Prin urmare, flaconul nr.13 poate fi oriunde de la 0,33 la 3 femtograme/ml. Daca puteti detecta apa din sticla nr.13 sunteti categoric mai sensibili decat un test ELISA, in ciuda uneltelor primitive si a echipamentului necostisitor! Remarcati ca eroarea initiala de utilizare a 2,5 g in loc de 2,3 g nu face decat sa adauge o alta eroare de 10%.

Daca doriti sa calculati cate molecule de sare puteti detecta, selectati o concentratie la limita detectarii pe care o puteti obtine si puneti doua picaturi pe circa 6,5 cm2 de servet de hartie, apoi frecati-l pe piele. Presupuneti ca se absoarbe o picatura. Daca puteti detecta apa din flaconul nr.13, ati detectat 510 000 molecule (10-15 fg/ml impartit la 58,5 g/M, inmultit cu 6,02 x 1023 molecule/M, impartit la 20 picaturi/ml). Apa din flaconul nr.12 va avea, prin urmare, de 10 ori mai multe molecule intr-o picatura si asa mai departe. Chiar daca eroarea dumneavoastra este un factor de 2 (100%), tot puteti sa va faceti o idee destul de corecta despre ce puteti masura.

Standardele de absorbtie atomica incep la concetratii bine determinate, exacte; este usor sa faci o sene mai precisa de dilutii cu ele. Cand am testat clorura de iridiu prin aceasta metoda de testare pe piele, am putut detecta 3 025 molecule!

Depanare
Intotdeauna extindeti setul pana cand obtineti un rezultat negativ (acest lucru ar trebui sa se intample cel putin la flaconul nr.18). Daca intotdeauna detectati sarea, inseamna ca ati scuturat flaconul!

Nu incercati niciodata sa reutilizati un flacon daca ati varsat lichid atunci cand turnati in el. Luati un flacon nou.
Sensibilitatea testarii substantei toxice in produs

Luati cateva lame de Salmonella si Shigella si gasiti niste lapte care testeaza pozitiv cel putin la una din ele. Faceti o serie de dilutii din acel lapte pana la flaconul nr.41, fiind atenti sa nu scuturati flacoanele. Incepeti cu 2 picaturi de lapte in flaconul nr.l. Folositi o pipeta pentru ochi pentru a pune 2 picaturi in flaconul urmator. Incepeti testarea la flaconul nr.14, folosind lama care a testat pozitiv. Veti invata mai tarziu sa cautati cu ajutorul frecventei. Sensibilitatea mea era, de regula, cam la flaconul nr.12, pentru o diversitate de patogeni. Acelasi lucru s-a intamplat cu elementele toxice incepand cu solutiile standard, la circa 1 000 ng/ml, ceea ce indica faptul ca aceasta metoda este mai putin sensibila decat testarea pe piele.