lectia de microscopie

Lectie de microscopie
Scop: observarea la microscop a stadiilor de trematode din saliva si urina.
Materiale:
a.    Un microscop de mica putere. Nu aveti nevoie de o rezolutie mare.
 O marire totala de lOOx este suficienta pentru cele patru trematode comune, Fasciolopsis, viermele de galbeaza, trematodul hepatic uman si trematodul pancreatic.
b.    Lame de sticla si lamele protectoare.
c.    O pipeta oculara de unica folosinta.
d.    In scopuri sanitare (pentru stergerea suprafetelor meselor, a lamelor, a microscopului si a propriilor maini), cea mai potrivita este o solutie de 50% pana la 70% de alcool de cereale - nu alcool pentru frectie (alcool sanitar)! Diluati 7 parti de alcool de cereale de 95% cu trei parti de apa. Vodca sau alcoolul de cereale de 76% pot fi utilizate nediluate.
e.    Formaldehida, 20%. La farmacii se gaseste, de obicei, formaldehida 37%. Diluati-o cu parti egale de apa pentru a obtine l81/2 %, care este suficient de apropiata de cea de 20%, cu scopul de a „fixa” (omori) specimenele. Depozitati-o intr-un flacon de sticla in garaj, departe de lumina solara. Etichetati-o. Specimenele fixate corect nu-si pierd aspectul de „viu”.
f.    Solutie de iod. Aceasta este utila doar pentru esantioanele de urina.
Sunt utile atat iodul Lugol, cat si tinctura de iod. Cereti unui farmacist sa va prepare solutie de Lugol dupa cum urmeaza:
 * 44 grame (1 1/2 uncie) de cristale de iod
  * 88 grame (3 uncii) cristale de iodura de potasiu
Ambele se dizolva intr-un litru de apa filtrata. Poate fi nevoie de aproximativ o zi, timp in care se agita fecvent flaconul.

Metoda pentru saliva:

1.    Turnati formaldehida 20% intr-un mic flacon de sticla colorata sau intr-un alt recipient pana la o inaltime de circa 3 mm. Pastrati-l bine inchis.
2.    Persoanei care urmeaza a fi testata i se cere sa saliveze in flacon, pentru ca organismele sa fie imediat „fixate” fara a mai fi racite in prelabil. Volumul total trebuie sa fie aproximativ dublu fata de volumul initial de formaldehida folosit. Faceti un semn pe flacon pentru ca subiectul sa stie cat trebuie sa produca. Concentratia rezultata a formaldehidei va fi de circa 10%.
3.    Scuturati flaconul de cateva ori. Puneti-l deoparte timp de 24 ore pentru a se aseza (mai putin, daca testarea este urgenta).
4.    Cu un picurator, luati putin din depozitul de pe fundul flaconului. Puneti o picatura pe o lama si aplicati o lamela de protectie.
5.    Priviti sub un microscop cu rezolutie mica. Comparati ceea ce observati cu specimenele obtinute pe lamele de la o firma care livreaza materiale biologice.
Nota: persoanele cu HIV si SIDA forma moderata vor prezenta unul pana la zece stadii ale trematodelor pe o lama. Este nevoie de mai multe ore de cercetare. Persoanele cu HIV si SIDA forma severa prezinta 10 sau mai multe stadii ale trematodelor pe o lama; acest lucru le face mult mai usor de gasit. Persoanele cu cancer terminal netratat au mult mai multe stadii ale trematodelor decat persoanele relativ sanatoase.

Metoda pentru urina:
1.    Pregatiti dinainte flacoanele cu formaldehida. Puneti circa 0,6 pana la 1,3 cm de formaldehida in fiecare. Pastrati-le bine inchise.
2.    Adaugati in formafdehida urina prospata162 de la un bolnav de cancer sau de HIV, in cantitati aproximativ egale, obtinand astfel o solutie de formaldehida 10%. Scuturati imediat flaconul. Lasati sa se decanteze timp de cateva ore. Sedimentul are un mare numar de stadii ale trematodului. Victimele cancerului de col uterin sau de prostata vor prezenta un numar mai mare de stadii in urina decat cele suferind de alte tipuri de cancer.
3.    Colorarea lamei este optionala. Ajuta, intr-o oarecare masura, la evi¬dentierea stadiilor trematodului. Preparati solutie Lugol ca mai sus. Lamele pot fi colorate in oricare dintre aceste doua moduri:
* punei o picatura de urina „fixata” pe o lama. Adaugati o picatura de solutie Lugol 50% (diluati 1:1 cu apa filtrata). Aplicati lamela protectoare.
    * puneti o picatura de urina „fixata” pe o lama. Aplicati lamela protectoare. Adaugati 1 pana la 3 picaturi de solutie Lugol pe marginea lamelei protectoare si lasati sa se intinda intre lamele.
Nota: persoanele care au fost tratate pentru cancer sau HIV folosind oricare dintre medicamentele cunoscute pot prezenta doar 1 pana la 2 stadii ale trematodelor la o picatura de saliva sau de urina. Din acest motiv, este posibil sa fiti nevoit sa cercetati 20 de lamele sau mai mult pana sa gasiti trematode. Persoanele foarte bolnave pot prezenta pana la 10 paraziti la o picatura (lama).